外泌体（Exosomes）广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。它是具有脂质双层膜结构的微小膜泡，大小为30-150nm左右。外泌体可以携带丰富的RNA、DNA、蛋白质等物质在细胞和组织之间自由穿梭，参与细胞间的通讯网络。外泌体广泛参与了机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、肿瘤生长于侵袭等多种生物过程。

然而外泌体中的miRNA虽然种类较多，但其丰度并不高，对于微量样本来说，在提取外泌体后就很难进行miRNA的广泛筛选工作了。基于这种研究的瓶颈问题，华盈生物引进了先进的UMI微量miRNA建库方法，有效解决了外泌体中微量miRNA的测序筛选问题。同时，由于UMI独特的技术原理，在核酸PCR放大过程中，不同样本间UMI的比例与原始样本RNA的含量始终保持一致，这样就避免了核酸在PCR放大过程中产生的系统误差，有效解决了外泌体miRNA测序筛选的系统问题。

               
                    图1 外泌体生物学过程示意图

技术路线

• 接头连接：将预腺苷化的3’和5’接头通过连接酶依次加到miRNA上。

• cDNA合成：逆转录（RT）引物中包含UMI标签序列。（RT）引物与3’接头的一个区域结合，促使miRNA转化为cDNA（每个miRNA分子分配到一个UMI）。

• 文库扩增：文库扩增采用通用正向引物反向引物，产物经磁珠纯化后用于质控分析与上机测序。

• 建库时在RT反应过程中引入UMI（Unique Molecular Indices）。

                      图2. UMI微量miRNA建库原理

服务流程

华盈生物优势

1、双平台外泌体制备

华盈生物提供经典的超离方法以及试剂盒法，客户可根据样本情况合理选择外泌体制备方法。

2、外泌体鉴定全套服务

在外泌体鉴定阶段，华盈生物不仅可以提供经典的NTA分析，还可以提供外泌体透射电镜拍摄、外泌体标志物蛋白Western Blot鉴定等。

3、新型建库测序技术

在PCR扩增前，在所有的miRNA分子上加入分子条形码（UMI），跟踪原始样本中初始的miRNA拷贝数，排除建库扩增带来的bias，准确还原样本的原始状态。

4、起始量低

QIASeq miRNA Library Kit可用于少量样品中的miRNA鉴定与定量，实现1-5 ng总RNA建库，大大提高了有限起始量样本的研究与未来临床检测运用。 

5、质控严格

从外泌体分离、RNA提取到建库和测序，层层环节进行质控。

6、专业的生物信息学分析

华盈生物具有强大的生物信息学团队，能够满足客户对数据各类深入的分析要求。

数据分析流程：

参考文献：

1.       Han Mingli,Hu Jianguo,Lu Pengwei et al. Exosome-transmitted miR-567 reverses trastuzumab resistance by inhibiting ATG5 in breast cancer.[J] .Cell Death Dis, 2020, 11: 43.

2.       Hou Zuoxu,Qin Xinghua,Hu Yuanyuan et al. Longterm Exercise-Derived Exosomal miR-342-5p: A Novel Exerkine for Cardioprotection[J] .Circ. Res., 2019, 124: 1386-1400.

3.       Zhang Jia-Tao,Qin Hao,Man Cheung Fiona Ka et al. Plasma extracellular vesicle microRNAs for pulmonary ground-glass nodules.[J] .J Extracell Vesicles, 2019, 8: 1663666.

4.       Zhang Yalin,Kim Min Soo,Jia Baosen et al. Hypothalamic stem cells control ageing speed partly through exosomal miRNAs.[J] .Nature, 2017, 548(7665): 52-57.

5.       Ying Wei,Riopel Matthew,Bandyopadhyay Gautam et al. Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity.[J] .Cell, 2017, 171(2): 372-384.e12.

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