外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为 30 ~ 150 nm 的具有脂质双层膜的微小囊泡[1]（图1）。它广泛存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。2013年，发现细胞囊泡转运机制的科学家们，荣获了当年的诺贝尔生理学或医学奖。作为人体内的一类重要囊泡，外泌体自2013年起逐步成为科研热点。

图 1 外泌体的形成与分泌

       
       大多数类型的细胞都可以分泌外泌体，同时外泌体也广泛存在于体液中，包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA 等）、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面 marker 主要有 CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27 等[2]（图 2）。因此，外泌体几乎可以与任何疾病相关联，成为疾病标志物、疾病机理、药物开发等研究的创新热点。

图 2外泌体的来源及内含物

华盈生物外泌体服务

       华盈生物致力于为广大研究人员和企业提供高品质的外泌体研究解决方案。华盈生物不仅自主研发了新型的EIQ3外泌体提取试剂盒，还提供包括外泌体超速离心、外泌体NTA分析、外泌体透射电镜拍摄、外泌体标志物蛋白Western Blot鉴定、外泌体蛋白质谱分析、外泌体分泌蛋白筛选、外泌体microRNA筛选、外泌体microRNA数字PCR检测等一系列服务环节的“一站式”外泌体服务体系，将为广大用户提供外泌体研究多方位的便利与支持。

外泌体分离‍‍

• 外泌体EIQ3提取试剂盒

       华盈生物自主研发的Exosome Isolation Q3（简称EIQ3）系列外泌体提取剂盒，不仅能有效提高外泌体得率，同时可以显著减少杂蛋白残留（如血清高丰度蛋白）。EIQ3试剂盒体系针对血清、血浆、尿液、细胞上清等不同样本单独开发和优化，为提高外泌体得率，增强外泌体研究的数据稳定性和可靠性提供保障。

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货号                       产品名称                            规格                   说明

EIQ3-01001           血清外泌体提取试剂盒           150 rxns            以200μL 血清样本为一次反应

EIQ3-02001           血浆外泌体提取试剂盒           150 rxns            以200μL 血浆样本为一次反应

EIQ3-03001           尿液外泌体提取试剂盒            10 rxns             以10mL 尿液样本为一次反应

EIQ3-04001           细胞上清外泌体提取试剂盒      10 rxns            以10mL 上清样本为一次反应

• 外泌体超速离心‍

       超速离心是从生物体液或细胞上清分离外泌体的金标准方法。采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。目前在国内外的重要期刊如Cell、Nature、Science以及其众多子刊中，超速离心是普遍应用的经典技术手段。

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       华盈生物外泌体提取平台，共有四台超速离心机和各种型号转子，可满足大批量样本同时进行超离的需求。同时，华盈生物的外泌体超速离心实验体系在经典的实验方法上进行了大量的优化和调整，显著提高了外泌体超速离心的得率和稳定性。华盈生物的外泌体超离平台不但可以进行外泌体的提取工作，还可承接工业化的无外泌体血清制备项目。

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图 3 外泌体超离流程示意图

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外泌体鉴定服务

       对分离提取的外泌体进行鉴定的经典方案有：NTA分析（Nanoparticle Tracking Analysis）、电镜分析、蛋白标志物Western Blot鉴定等。华盈生物拥有完善的外泌体鉴定平台和技术体系，可提供全方位的外泌体鉴定服务。

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• NTA粒径分析

       纳米颗粒跟踪分析技术软件（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA）单独跟踪视野中每一个颗粒的运动轨迹以得到每一个颗粒的粒径信息。

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ZetaView ，由德国Particle Metrix公司推出，采用单一颗粒跟踪技术，结合经典微电泳技术和布朗运动，检测10nm–3000nm 范围内的颗粒，是新一代的纳米颗粒分析手段。ZetaView通过纳米颗粒zeta电位的跟踪与计算，分析待测粒子的粒径和数量，其优势为自动化程度高，数据重复性好。

• 外泌体电镜分析

双层囊膜结构（茶托状）是外泌体重要标志之一，但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。而透射电子显微镜 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可达0.1 ~ 0.2 nm，可将被观察物体放大至数百万倍，是外泌体双层囊膜超微结构观测的经典方法。

     
        华盈生物有多种外泌体样品和上千张外泌体电镜图片的拍摄经验，在制样、拍摄、选片等方面具备丰富经验 (如图4)。

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图4. 实拍电镜结果展示

• 外泌体标志物鉴定‍

华盈生物通过对经典文献中普遍采用的抗体进行验证和挑选，优选了多种外泌体标志物抗体，如CD9、CD63、CD81、TSG101、Alix等，针对不同来源的外泌体，我们还可协助用户对标志物进行合理选择，并可提供常见外泌体标志物的Western blot检测服务。

外泌体分析

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        华盈生物可提供多种外泌体数分析服务，包括：外泌体蛋白质谱分析、外泌体分泌蛋白筛选、外泌体microRNA测序、外泌体microRNA芯片分析、外泌体microRNA数字PCR检测等。

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• 外泌体蛋白组分析
  

        华盈生物拥有LC-MS/MS和抗体芯片两大技术平台， 针对不同的研究需求，为用户推荐合适的技术选择。

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质谱技术：适用于寻找广泛类型外泌体差异蛋白谱，在膜蛋白筛选上优势明显。

抗体芯片：适用于特定种类分泌型蛋白筛选研究，在大批量样品实验中具有优势。

• ‍外泌体microRNA筛选

        华盈生物针对外泌体的microRNA研究的不同阶段，华盈生物可提供microRNA的测序分析、芯片筛选和数字PCR（ddPCR）检测服务。

测序技术：适用于多类型RNAs广泛筛选，包括microRNA、lncRNA、snRNA等。

基因芯片：适用于microRNA筛选研究，实验周期短，在大批量样品实验中具有优势。

• 外泌体数字PCR定量检测

数字PCR：在微量样品的核酸检测方面，数字PCR具备显著优势，其灵敏度比普通RT- PCR高出3个数量级，尤其适合外泌体研究项目。

参考文献‍‍‍

1. 1.  Bian X, Li B, Yang J, et al. Regenerative and protective effects of dMSC-sEVs on high-glucose-induced senescent fibroblasts by suppressing RAGE pathway and activating Smad pathway[J]. Stem Cell Research & Therapy, 2020, 11: 1-16.
   2.  Ren Y, Chen Y, Zheng X, et al. Human amniotic epithelial cells ameliorate kidney damage in ischemia-reperfusion mouse model of acute kidney injury[J]. Stem cell research & therapy, 2020, 11(1): 1-16.
   3.  Shi Y, Kang X, Wang Y, et al. Exosomes Derived from Bone Marrow Stromal Cells (BMSCs) Enhance Tendon-Bone Healing by Regulating Macrophage Polarization[J]. Medical Science Monitor: International Medical Journal of Experimental and Clinical Research, 2020, 26: e923328-1.
   4.  Bai X, Li J, Li L, et al. Extracellular Vesicles From Adipose Tissue-Derived Stem Cells Affect Notch-miR148a-3p Axis to Regulate Polarization of Macrophages and Alleviate Sepsis in Mice[J]. Frontiers in immunology, 2020, 11: 1391.
   5.  Yang C, Luo L, Bai X, et al. Highly-expressed micoRNA-21 in adipose derived stem cell exosomes can enhance the migration and proliferation of the HaCaT cells by increasing the MMP-9 expression through the PI3K/AKT pathway[J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2020, 681: 108259.
   6.  Qiao L, Hu S, Liu S, et al. microRNA-21-5p dysregulation in exosomes derived from heart failure patients impairs regenerative potential[J]. The Journal of clinical investigation, 2019, 129(6): 2237-2250.
   7.  Wang T, Jian Z, Baskys A, et al. MSC-derived exosomes protect against oxidative stress-induced skin injury via adaptive regulation of the NRF2 defense system[J]. Biomaterials, 2020, 257: 120264.
   

2. 8.  Chen Chu-Wen,Fu Min,Du Zhi-Hao et al. Long Noncoding RNA MRPL23-AS1 Promoteoid Cystic Carcinoma Lung Metastasis.[J] .Cancer Res, 2020, 80: 2273-2285.
   9.  Tran TH et al. Exosomes as nanocarriers for immunotherapy of cancer and inflammatory diseases. Clin Immunol.  2015. 160(1):46-58 

3. 10.  Ibrahim A et al. Exosomes: Fundamental Biology and Roles in Cardiovascular Physiology. Annual Review of Physiology.  2016. 78(1): 67-83.

4. 11. Clark David J et al. Triple SILAC quantitative proteomic analysis reveals differential abundance of cell signaling proteins between normal and lung cancer-derived exosomes.  J Proteomics. 2016. 133: 161-169.